A purificação de proteínas é o processo de separação de frações proteicas de um propósito específico de tecidos, células ou misturas de proteínas. A purificação de proteínas não deve apenas promover uma forte pureza da proteína isolada, mas também manter a atividade biológica da proteína. Portanto, é necessário projetar um ou mais esquemas de purificação de combinação de acordo com diferentes propriedades proteicas. A principal estratégia para a purificação de proteínas é explorar as semelhanças e diferenças entre diferentes proteínas. Com base na semelhança entre proteínas, o material não proteico pode ser removido e, em seguida, a proteína alvo pode ser separada com base nas diferenças de proteínas. Especialmente com o rápido desenvolvimento da tecnologia de engenharia genética, embora muitas proteínas sejam expressas pela recombinação genética, o nível de purificação de proteínas está diretamente relacionado à pureza e atividade da proteína. Portanto, a purificação de proteínas continua sendo um tópico importante na biotecnologia moderna.
Objetivo
Por um lado, o isolamento e purificação de proteínas são particularmente importantes para o estudo aprofundado da estrutura e função das proteínas e, por outro lado, a separação e purificação de proteínas também estão diretamente relacionadas ao efeito da aplicação das proteínas. Portanto, a purificação de proteínas desempenha um papel importante na pesquisa e aplicação da ciência biológica, e a tecnologia de separação e purificação de proteínas também é uma tecnologia essencial na indústria biológica.
O caminho
O princípio da purificação de proteínas é separar a proteína alvo com eficiência, taxa, rendimento e pureza razoáveis, mantendo sua atividade biológica e integridade química. As principais etapas incluem a seleção de materiais experimentais, pré -tratamento, extração de proteínas, classificação de proteínas brutas, classificação de proteínas finas e identificação de proteínas.
O processo de purificação deve prestar atenção a: 1 para minimizar o impacto na atividade proteica, como evitar pH muito alto ou muito baixo, alta temperatura e efeitos de metais pesados; 2. Opere a baixa temperatura; 3. Tente manter o nível principal de conteúdo de proteínas na amostra.
Classificação de
A purificação de proteínas pode ser classificada de acordo com o tipo de método de purificação:
I. Método de precipitação, incluindo deposição de sal, usando íons salgados para destruir a camada solidificada na superfície da proteína, expondo a área hidrofóbica e, em seguida, deposição para alcançar o objetivo da purificação preliminar; A deposição orgânica, usando solventes orgânicos para reduzir a atividade da água, destrói o filme coagulado na superfície da proteína, levando à precipitação de proteínas. A precipitação é um método de purificação suave, mas a pureza não é alta e pode ser usada como um processo de purificação primária.
Segundo o método de diálise, incluindo bolsa de diálise e método de ultrafiltração. Por diálise e ultrafiltração, pequenas impurezas moleculares podem ser eliminadas e a solução proteica também pode ser substituída.
3. Os métodos cromatográficos incluem cromatografia em gel de peneira molecular, cromatografia de troca iônica, cromatografia de afinidade (cromatografia por afinidade quelatória por metal, cromatografia de proteína A/G, proteína receptor, substrato, etc.), cromatografia hidrofóbica, cromatografia reversa e cromatografia líquida de alto desempenho. Para obter melhores resultados, é frequentemente uma combinação de dois métodos cromatográficos, como cromatografia de afinidade e cromatografia de troca iônica.
Além dos métodos acima, existem muitos outros métodos de purificação, como a centrifugação do gradiente de densidade, que são adequados para a produção de proteínas de alta pureza, mas requerem condições experimentais mais altas. Os cristais de proteínas são adequados para a análise da estrutura biológica, como a transmissão x.
Horário de postagem: 2025-07-01