Peptídeos sintéticos e proteínas recombinantes agindo separadamente como antígenos

Os antígenos proteicos recombinantes geralmente têm vários epítopos diferentes, alguns dos quais são epítopos de sequência e outros são epítopos estruturais. Os anticorpos policlonais obtidos por imunização de animais com antígenos desnaturados são misturas de anticorpos específicos para epítopos individuais e podem ser usados ​​em geral para detectar estruturas naturais ou proteínas alvo desnatadas. Um benefício colateral do uso de proteínas desnaturadas como imunoógenos é que as proteínas desnaturadas tendem a ser mais imunogênicas e podem estimular uma forte resposta imune em animais.

O sistema de expressão de Escherichia coli é geralmente escolhido para fins antigênicos, porque é o sistema mais caro em termos de tempo e dinheiro. Para melhorar a possibilidade da expressão da proteína alvo e a conveniência da purificação, às vezes apenas um pequeno fragmento da proteína alvo, como um domínio específico, é expresso.

A estrutura tridimensional das proteínas

O domínio específico de uma proteína

Se o objetivo da preparação de anticorpos é exclusivamente para a detecção de WB, é econômico e rápido usar pequeno peptídeo sintético como antígeno, mas existe um risco de fraca imunogenicidade ou não-regenicidade devido à seleção inadequada do segmento peptídico. Como a preparação do anticorpo requer um longo período, dois ou três segmentos de peptídeos diferentes são frequentemente selecionados para preparar anticorpos usando antígeno polipeptídico para garantir a taxa de sucesso do experimento.

É necessário que a pureza do antígeno polipeptídeo para imunização seja superior a 80%. Embora uma pureza mais alta possa teoricamente obter anticorpos com melhor especificidade, na prática, os animais sempre produzem um grande número de anticorpos não específicos, mascarando assim os benefícios da pureza do antígeno.

Além disso, a preparação de anticorpos a partir de pequenos peptídeos deve ser reticulada ao antígeno transportador apropriado para aumentar sua imunogenicidade. Dois portadores antigênicos comuns são KLH e BSA.