A resistência química dos peptídeos depende da composição e sequência de aminoácidos. Os peptídeos liofilizados são geralmente mais duráveis do que seus colegas em solução. Os potenciais métodos de degradação dos peptídeos são os seguintes:
1, hidrólise: isso geralmente é incluído no ASP na sequência (d) para o problema no peptídeo, é facilmente desidratado para formar um intermediário de imide anel. Por exemplo, há ASP na sequência. -Pro (DP) Nesse caso, o intermediário imide em forma de anel produzido pela catálise ácida levaria à clivagem da cadeia peptídica. Da mesma forma, asp-gly (DG) está presente na sequência e, neste caso, o intermediário circular pode ser hidrolisado no modo ASP original de ácido isoascartic (inofensivo) ou em um análogo potencialmente inativo. Finalmente, todos os padrões de ácido aspártico podem ser completamente convertidos em análogos do ácido isoescátrico. "Em um nível menor, ele contém Ser (s), uma sequência que também forma um intermediário imide circular que finalmente limpa a cadeia peptídica".
2, Deamidação: Esta reação catalisada por base ocorre frequentemente na presença de Asn-Gly (Ng) ou Gln-Gly (QG) na sequência e segue um mecanismo de sequência ASP-GLY (DG) semelhante. A desaminação (perda de amina) na sequência ASN-Gly produz um intermediário imide cíclico, que é então hidrolisado para produzir análogos de ácido aspártico ou ácido isoespátrico ASN. Além disso, o intermediário do anel-imida pode causar D-ASP ou derotação externa ao ASND-ISO-algo semelhante ao ASP, que pode estar inativo.
3, Oxidação: Cys e Met Resíduos são os principais resíduos que sofrem oxidação reversível. A oxidação da cisteína é acelerada em valores mais altos de pH, onde o tiol remove mais prontamente protonação e é propenso a gerar ligações dissulfeto em ou entre cadeias. A ligação dissulfeto pode ser facilmente revertida pelo tratamento com ditiotreitol (DTT) ou TRIS (2-carboxiletilfosfina) cloridrato (TCEP). A metionina é oxidada por química e fotoquímica para produzir dióxido de metionina, que entra ainda mais no dióxido de metionina, ambos difíceis de reverter.
4, Diketopiperazine and pyroglutamic acid production: formation of dimethylpiperazine usually occurs when Gly is in the third position of the N terminus, especially if Pro or Gly is in position 1 or 2. This reaction involves nucleophilic attack of the N-terminal nitrogen on the amide benzyl group between the second and third amino acids, resulting in cleavage of the first two amino acids of the Método da diketopiperazina. Por outro lado, se o GLN estiver localizado no terminal N, a formação de ácido piroglutâmico é quase inevitável. Esta é uma reação semelhante na que o nitrogênio N-terminal ataca o carbono da base da cadeia lateral do GLN para formar a desaminação de um análogo do peptídeo piroglutamil. Essa conversão também ocorre com o terminal N contendo análogos do peptídeo de piroglutamato.
5. Racemização: Este termo é amplamente utilizado para se referir à perda geral de integridade quiral de um aminoácido ou peptídeo. A racemização envolve a conversão de um aminoácido de um enantiômero catalisado pela base, geralmente forma L, para o tipo 1 dos enantiômeros de forma L e D. : 1. Mistura. Isso é mais importante durante a geração de peptídeos, mas menos problemático no peptídeo acabado. Além disso, o comutador é difícil de detectar e não pode ser controlado.
Uma abordagem geral para evitar ou minimizar a degradação do peptídeo é degradar o peptídeo para-20 ° C ou melhor-80 ° C para armazenamento liofilizado, se disponível. Se o peptídeo estiver em solução aquosa, cada amostra de alíquota deve ser congelada para evitar congelamento e descongelamento. A exposição a PH & GT deve ser evitada; Médio 8. No entanto, se for necessária pH & gt; Se o peptídeo derreter às 8, sua exposição deve ser mínima.
Horário de postagem: 2025-07-01