Fundo
O melanotan I, também conhecido como Afamelanotida, é um polipeptídeo linear composto por 13 aminoácidos que está preparado para desempenhar um papel cada vez mais significativo na pesquisa farmacêutica. Os principais nomes em inglês para Melanotan I são Melanotan-1 e Afamelanotida. Como um análogo sintético do hormônio estimulador de α-melanócitos α-MSH), o Melanotan I pode ser usado para tratar distúrbios de fotossensibilidade causados por protoporfiria eritropoiética. Atualmente, a maioria dos produtos Melanotan I são rotulados apenas para uso em pesquisa e ainda não se destinam à aplicação em humanos. Na síntese tradicional em fase sólida, a escolha da resina impacta significativamente a eficiência do acoplamento e a pureza final do produto.
Informações básicas
Nome chinês: Melanotan 1
Nome inglês: Melanotan-1
Nº da empresa: GT-A006
Nº CAS: 75921-69-6
Sequência: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Fórmula molecular: C78H111N21O19
Peso molecular: 1646,88
Método de preparação
EU. Preparação de Resina Fmoc-Val-Amino
Etapa 1:Pesar 11,11g (5mmol) de resina Ramage Amida AM com grau de substituição de 0,45mmol/g e adicionar a um reator de fase sólida. Adicione DCM para inchar a resina por 30 minutos e depois escorra. Lave três vezes com DMF. Adicione uma solução de DMF contendo 20% de piperidina (v/v) e reaja por 5 minutos. Adicione outra solução de piperidina DMF a 20% e reaja durante 10 minutos, com uma lavagem de DMF no meio. Após a conclusão da reação, escorra e lave três vezes com DMF.
Etapa 2:Dissolva 5,09g de Fmoc-Val-OH, 2,02g de HOBT (1-hidroxibenzotriazol) e 2,32ml de DIC (N,N'-diisopropilcarbodiimida) em DMF a 0°C. Após dissolução completa, adicionar a mistura à coluna de reação e reagir à temperatura ambiente durante 1 hora. Monitore o progresso da reação utilizando o teste da ninidrina, garantindo um resultado negativo. Após a conclusão da reação, lave três vezes com DMF para obter a resina Fmoc-Val-amino.
II. Preparação de Peptídeo de Resina Totalmente Protegido de Melanotan I.
Etapa 1:Adicione piperidina a 20% em solução de DMF (proporção de volume) à Fmoc-Val-aminoresina acima. Reagir por 5 minutos, depois adicionar outra porção de piperidina a 20% em solução de DMF e reagir por 10 minutos. Lave uma vez com DMF durante o intervalo. Após a reação estar completa, secar sob vácuo e lavar três vezes com DMF.
Etapa 2:Dissolva 5,06 g de Fmoc-Pro-OH, 2,02 g de HOBT (1-hidroxibenzotriazol) e 2,32 ml de DIC (N,N'-diisopropilcarbodiimida) em DMF a 0°C. Após dissolução completa, adicionar a mistura à coluna de reação e reagir à temperatura ambiente durante 1 hora. Monitore o progresso da reação usando o teste da ninidrina (teste Kaiser) até obter resultados negativos. Após a conclusão, lave três vezes com DMF para obter Fmoc-Pro-Val-aminoresina.
Etapa 3:Seguindo o método descrito na Etapa 2, acoplar sequencialmente cada aminoácido de acordo com a sequência de Melanotan I. Após a conclusão da reação de acoplamento Ac-Ser(tBu)-OH, lave três vezes com DMF, três vezes com DCM (diclorometano) e três vezes com metanol. Secar sob vácuo para obter 23,89 g de peptídeo ligado à resina Melanotan I totalmente protegido.
III. Preparação do Peptídeo Bruto Melanotan I
23,89 g de peptídeo Melanotan I totalmente protegido ligado à resina foram colocados em um frasco de fundo redondo. A 0°C, 250 ml de um coquetel de clivagem pré-preparado (composto por TFA:tioanisol:fenol:triisopropilsilano:água = 82,5:7,5:5:3:2 em volume) foram adicionados lentamente sob agitação. A mistura reagiu a baixa temperatura durante 0,5 horas, seguida de reação à temperatura ambiente durante 2 horas. A solução de clivagem foi então filtrada sob vácuo. Esta solução foi adicionada lentamente a 2 L de éter dietílico anidro gelado sob agitação. O peptídeo bruto foi isolado por filtração, lavado três vezes com éter dietílico gelado e foram obtidos 8,55 g de peptídeo bruto Melanotan I.
4. Preparação do Peptídeo Purificado Melanotan I
Etapa 1:Dissolver o peptídeo Melanotan I bruto em 100 ml de água purificada e filtrar através de uma membrana de 0,45 μm para obter uma solução peptídica bruta.
Etapa 2:Purifique o peptídeo Melanotan I bruto usando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Utilize uma coluna de compressão axial dinâmica DAC-HB50 com fase móvel A (solução aquosa de ácido trifluoroacético a 0,05%) e fase móvel B (0,05% de ácido trifluoroacético em acetonitrila). Execute a eluição gradiente para separação e purificação. Detecte a amostra usando um detector UV e colete a solução peptídica correspondente ao pico alvo em frações.
Etapa 3:Após purificação por HPLC, obter 180 ml de solução de trifluoroacetato de Melanotan I com pureza superior a 99%. Concentre a solução até 50 ml por evaporação rotativa.
Etapa 4:Equilibre a coluna de cromatografia com água deionizada e carregue 50 ml da solução purificada de trifluoroacetato de Melanotan I (pureza> 99%). Eluir durante 50 minutos num sistema de solução aquosa de ácido acético a 2%. Concentre o produto alvo coletado em 80 ml por meio de evaporação rotativa. Realize a pré-liofilização e a liofilização para obter finalmente 5,33 g de peptídeo purificado de Melanotan I, com um rendimento de 32,33%.
Horário da postagem: 05/01/2026