Como um instrumento de alta precisão, o HPLC pode facilmente causar alguns pequenos problemas incômodos se não for operado da maneira correta durante o uso.Um dos problemas mais comuns é o problema de compressão da coluna.Como solucionar rapidamente um cromatógrafo com defeito.O sistema HPLC consiste principalmente em um frasco reservatório, uma bomba, um injetor, uma coluna, uma câmara de temperatura da coluna, um detector e um sistema de processamento de dados.Para todo o sistema, os pilares, bombas e detectores são os principais componentes e os principais locais propensos a problemas.
A chave para a pressão da coluna é a área que precisa de muita atenção ao usar HPLC.A estabilidade da pressão da coluna está intimamente relacionada ao formato do pico cromatográfico, à eficiência da coluna, à eficiência de separação e ao tempo de retenção.A estabilidade da pressão da coluna não significa que o valor da pressão seja estável em um valor estável, mas sim que a faixa de flutuação da pressão esteja entre 345kPa ou 50PSI (permitindo o uso de eluição gradiente quando a pressão da coluna estiver estável e mudando lentamente).Pressão muito alta ou muito baixa é um problema de pressão da coluna.
Os mais propensos a falhas e soluções de HPLC
1, a alta pressão é o problema mais comum no uso de HPLC.Isso significa um aumento repentino de pressão.Em geral, existem os seguintes motivos: (1) Em geral, isto se deve ao bloqueio do canal de fluxo.Neste ponto, devemos examiná-lo por partes.a.Primeiro, corte a entrada da bomba de vácuo.Neste ponto, o tubo PEEK foi preenchido com líquido de forma que o tubo PEEK fosse menor que o frasco de solvente para ver se o líquido estava pingando à vontade.Se o líquido não estiver pingando ou pingando lentamente, a cabeça do filtro de solvente está bloqueada.Tratamento: Mergulhe em ácido nítrico 30% por meia hora e enxágue com água ultrapura.Se o líquido pingar aleatoriamente, a cabeça do filtro de solvente está normal e está sendo verificada;b.Abra a válvula de purga para que a fase móvel não passe pela coluna e, se a pressão não for significativamente reduzida, a cabeça branca do filtro fica bloqueada.Tratamento: As espinhas filtradas foram removidas e sonicadas com isopropanol a 10% durante meia hora.Supondo que a pressão caia abaixo de 100 PSI, a cabeça branca filtrada está normal e está sendo verificada;c.Remova a extremidade de saída da coluna, se a pressão não diminuir a coluna fica bloqueada.Tratamento: Se for um bloqueio de sal tampão, enxágue 95% até que a pressão esteja normal.Se a obstrução for causada por algum material mais preservado, um fluxo mais forte do que a atual fase móvel deve ser usado para atingir a pressão normal.Se a pressão de limpeza a longo prazo não diminuir de acordo com o método acima, a entrada e a saída da coluna podem ser consideradas conectadas ao instrumento, pelo contrário, e a coluna pode ser limpa com a fase móvel.Neste momento, se a pressão da coluna ainda não for reduzida, a placa da peneira de entrada da coluna só poderá ser substituída, mas como o funcionamento não for bom, é fácil levar à redução do efeito da coluna, então tente usar menos.Para problemas difíceis, a substituição da coluna pode ser considerada.
(2) Configuração incorreta da vazão: A vazão correta pode ser redefinida.
(3) Razão de fluxo incorreta: o índice de viscosidade de diferentes proporções de fluxos é diferente, e a pressão do sistema correspondente do fluxo com maior viscosidade também é maior.Se possível, solventes de baixa viscosidade podem ser substituídos ou reajustados e preparados.
(4) Desvio de zero da pressão do sistema: ajuste o zero do sensor de nível de líquido.
2, a pressão é muito baixa (1) geralmente é causada por vazamento do sistema.O que fazer: Encontre cada conexão, especialmente a interface em ambas as extremidades da coluna, e aperte a área de vazamento.Remova o poste e aperte ou forre o filme de PTFE com força adequada.
(2) O gás entra na bomba, mas a pressão geralmente é instável neste momento, alta e baixa.Mais seriamente, a bomba não será capaz de absorver o fluido.Método de tratamento: abra a válvula de limpeza e limpe a uma vazão de 3~5ml/min.Caso contrário, as bolhas de ar eram aspiradas na válvula de escape usando um tubo de agulha dedicado.
(3) Sem saída da fase móvel: verifique se há fase móvel no frasco reservatório, se a pia está imersa na fase móvel e se a bomba está funcionando.
(4) A válvula de referência não está fechada: a válvula de referência é fechada após a desaceleração.Geralmente cai para 0,1.~ 0,2mL/min após fechar a válvula de referência.
Resumo:
Neste artigo, apenas problemas comuns em cromatografia líquida são analisados.É claro que, em nossa aplicação prática, encontraremos outros problemas.No tratamento de falhas, devemos seguir os seguintes princípios: alterar apenas um fator de cada vez para determinar a relação entre o fator hipotético e o problema;Geralmente, ao substituir peças para solução de problemas, devemos prestar atenção em colocar as peças intactas desmontadas de volta no lugar para evitar desperdícios;Formar um bom hábito de registro é a chave para o sucesso do tratamento de falhas.Concluindo, ao utilizar HPLC, é importante prestar atenção ao pré-tratamento da amostra e à operação e manutenção adequadas do equipamento.
Horário da postagem: 18 de setembro de 2023