Os mais propensos a falhas e soluções de HPLC

Como um instrumento de alta precisão, o HPLC pode facilmente levar a alguns pequenos problemas problemáticos se não for operado da maneira correta durante o uso. Um dos problemas mais comuns é o problema de compressão da coluna. Como solucionar rapidamente um cromatógrafo defeituoso. O sistema HPLC consiste principalmente em uma garrafa de reservatório, uma bomba, um injetor, uma coluna, uma câmara de temperatura da coluna, um detector e um sistema de processamento de dados. Para todo o sistema, os pilares, bombas e detectores são os principais componentes e os principais locais propensos a problemas.

A chave para a pressão da coluna é a área que precisa de muita atenção ao usar o HPLC. A estabilidade da pressão da coluna está intimamente relacionada à forma de pico cromatográfica, eficiência da coluna, eficiência de separação e tempo de retenção. A estabilidade da pressão da coluna não significa que o valor da pressão seja estável a um valor estável, mas que a faixa de flutuação da pressão está entre 345kpa ou 50psi (permitindo o uso da eluição do gradiente quando a pressão da coluna está estável e muda lentamente). Pressão muito alta ou muito baixa é um problema de pressão da coluna.

Os mais propensos a falhas e soluções de HPLC

1, alta pressão é o problema mais comum no uso de HPLC. Isso significa um aumento repentino da pressão. Em geral, há os seguintes motivos: (1) Em geral, isso se deve ao bloqueio do canal de fluxo. Neste ponto, devemos examiná -lo por partes. um. Primeiro, corte a entrada da bomba de vácuo. Nesse ponto, o tubo de espiada estava cheio de líquido, de modo que o tubo de espiada fosse menor que o frasco de solvente para ver se o líquido estava pingando à vontade. Se o líquido não estiver pingando ou pingando lentamente, a cabeça do filtro de solvente será bloqueada. Tratamento: Mergulhe em 30% de ácido nítrico por meia hora e enxágue com água ultrapura. Se o líquido escorrer aleatoriamente, a cabeça do filtro do solvente estará normal e está sendo verificada; b. Abra a válvula de purga para que a fase móvel não passe pela coluna e, se a pressão não for reduzida significativamente, a cabeça branca do filtro será bloqueada. Tratamento: Whiteheads filtrados foram removidos e sonicados com 10% de isopropanol por meia hora. Supondo que a pressão caia abaixo de 100psi, a cabeça branca filtrada é normal e está sendo verificada; c. Remova a extremidade de saída da coluna, se a pressão não diminuir, a coluna será bloqueada. Tratamento: Se for um bloqueio de sal tampão, enxágue 95% até que a pressão seja normal. Se a obstrução for causada por algum material mais altamente preservado, um fluxo mais forte do que a presente fase móvel deve ser usada para correr para a pressão normal. Se a pressão de limpeza a longo prazo não diminuir de acordo com o método acima, a entrada e a saída da coluna poderão ser consideradas conectadas ao instrumento pelo contrário, e a coluna poderá ser limpa com a fase móvel. No momento, se a pressão da coluna ainda não for reduzida, a placa de peneira de entrada da coluna só poderá ser substituída, mas uma vez que a operação não for boa, é fácil levar à redução do efeito da coluna, então tente usar menos. Para problemas difíceis, a substituição da coluna pode ser considerada.

(2) Configuração incorreta da taxa de fluxo: A taxa de fluxo correta pode ser redefinida.

(3) Taxa de fluxo incorreto: o índice de viscosidade de diferentes proporções dos fluxos é diferente, e a pressão do sistema correspondente do fluxo com maior viscosidade também é maior. Se possível, os solventes de viscosidade mais baixa podem ser substituídos ou reefigurados e preparados.

(4) Drift zero da pressão do sistema: ajuste o zero do sensor de nível de líquido.

2, a pressão é muito baixa (1) geralmente é causada pelo vazamento do sistema. O que fazer: encontre cada conexão, especialmente a interface nas duas extremidades da coluna, e aperte a área de vazamento. Remova a postagem e aperte ou alinhe o filme PTFE com força apropriada.

(2) O gás entra na bomba, mas a pressão geralmente é instável neste momento, alta e baixa. Mais seriamente, a bomba não será capaz de absorver o fluido. Método de tratamento: Abra a válvula de limpeza e limpe a uma taxa de fluxo de 3 ~ 5ml/min. Caso contrário, as bolhas de ar foram aspiradas na válvula de escape usando um tubo de agulha dedicado.

(3) Nenhuma saída de fase móvel: verifique se existe uma fase móvel na garrafa de reservatório, se a pia está imersa na fase móvel e se a bomba está em execução.

(4) A válvula de referência não está fechada: a válvula de referência é fechada após a desaceleração. Geralmente cai para 0,1. ~ 0,2 ml/ min após fechar a válvula de referência.

Resumo:

Neste artigo, apenas problemas comuns na cromatografia líquida são analisados. Obviamente, em nossa aplicação prática, encontraremos mais outros problemas. No tratamento de falhas, devemos seguir os seguintes princípios: apenas alterar um fator de cada vez para determinar a relação entre o fator hipotético e o problema; Geralmente, ao substituir as peças para solução de problemas, devemos prestar atenção em colocar as peças intactas desmontadas de volta para evitar desperdícios; Formar um bom hábito de registro é a chave para o sucesso do manuseio de falhas. Em conclusão, ao usar o HPLC, é importante prestar atenção ao pré -tratamento da amostra e operação e manutenção adequadas do equipamento.