Os antigénios proteicos recombinantes têm frequentemente vários epítopos diferentes, alguns dos quais são epítopos de sequência e outros são epítopos estruturais.Os anticorpos policlonais obtidos pela imunização de animais com antígenos desnaturados são misturas de anticorpos específicos para epítopos individuais e podem ser usados em geral para detectar estruturas naturais ou proteínas alvo desnaturadas.Um benefício colateral do uso de proteínas desnaturadas como imunógenos é que as proteínas desnaturadas tendem a ser mais imunogênicas e podem estimular uma forte resposta imunológica em animais.
O sistema de expressão de Escherichia coli é geralmente escolhido para fins antigênicos porque é o sistema mais caro em termos de tempo e dinheiro.De modo a melhorar a possibilidade de expressão da proteína alvo e a conveniência da purificação, por vezes apenas é expresso um pequeno fragmento da proteína alvo, tal como um domínio específico.
A estrutura tridimensional das proteínas
O domínio específico de uma proteína
Se o objectivo da preparação de anticorpos for apenas a detecção de wb, é económico e rápido utilizar pequenos péptidos sintéticos como antigénio, mas existe o risco de imunogenicidade fraca ou não regenicidade devido à selecção inadequada do segmento peptídico.Como a preparação de anticorpos requer um longo período, dois ou três segmentos peptídicos diferentes são frequentemente selecionados para preparar anticorpos usando antígeno polipeptídico para garantir a taxa de sucesso do experimento.
A pureza do antígeno polipeptídico para imunização deve ser superior a 80%.Embora uma pureza mais elevada possa teoricamente obter anticorpos com melhor especificidade, na prática, os animais produzem sempre um grande número de anticorpos inespecíficos, mascarando assim os benefícios da pureza do antigénio.
Além disso, a preparação de anticorpos a partir de pequenos péptidos deve ser reticulada ao antigénio transportador apropriado para aumentar a sua imunogenicidade.Dois transportadores antigênicos comuns são KLH e BSA.
Horário da postagem: 23 de março de 2023