Transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET)
A transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) é um processo de transferência de energia não radiativa, no qual a energia do Estado excitada do doador é transferida para o estado excitado aceitador através da interação de casais elétricos intermoleculares. Esse processo não envolve fótons e, portanto, não é radiativa. Este ensaio tem as vantagens de ser rápido, sensível e simples.
O corante usado no ensaio FRET pode ser idêntico. Mas na maioria das aplicações, diferentes corantes são realmente usados. Em resumo, a transferência de energia de ressonância luminosa é a transferência de um par de dipolos do doador (corante 1) para o aceitador (corante 2) quando o grupo doador é excitado. Em geral, o espectro de emissão do grupo fluoróforo doador se sobrepõe ao espectro de absorção do grupo aceitador. "Quando a distância entre os dois fluoróforos é apropriada (10 - 100 a), a transferência de energia fluoróforo do doador para o aceitador pode ser observada." O método de transferência de energia depende da estrutura química do receptor:
1. É convertido em vibração molecular, ou seja, a luz luminosa da transferência de energia desaparece. (O receptor é um extinto leve)
2. A emissão é mais intensa que o próprio receptor, resultando em um desvio para o vermelho no espectro secundário de fluorescência. ” (Os receptores são emissores luminosos).
O grupo doador (Edans) e o gene aceitador (dabcyl) estão uniformemente ligados ao substrato natural da protease do HIV e, quando o substrato não é desconectado, o dabcyl pode quenle edans e depois se torna indetectável ao fluorino. Após a desconexão da protease do HIV-1, Edans não é mais extinto por Dabcyl, e as luciferases de Edans podem ser posteriormente detectadas. A disponibilidade de inibidores de protease pode ser monitorada por alterações na intensidade da fluorescência do EDANS.
Os peptídeos FRET são ferramentas convenientes para estudar não especificidade da peptidase. Como seu processo de reação pode ser monitorado continuamente, ele fornece um método conveniente para detectar a atividade da enzima. O brilho produzido após a hidrólise das ligações peptídicas pelo doador/aceitador fornece uma medida da atividade enzimática nas concentrações nanomolares. Quando o peptídeo traste está intacto, mostra um desaparecimento repentino do flash interno, mas quando qualquer ligação peptídica oposta ao doador/aceitador quebra, ele libera um flash, que pode ser detectado continuamente e a atividade da enzima pode ser quantificada.
Horário de postagem: 2025-07-02